辣椒脉黄病毒P4蛋白多克隆抗体制备与应用

卜姗; 罗香文; 张德咏; 张松柏; 张宇; 刘勇; 《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：[目的]辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)属马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus),生产上主要侵染辣椒,目前在我国呈现快速扩展态势,因此,亟需开展PeVYV致病性研究,为分析对辣椒的潜在威胁提供依据.以PeVYV编码运动蛋白P4为免疫源,制备多克隆抗体,建立PeVYV P4蛋白特异性检测方法,为PeVYV P4蛋白功能研究奠定基础.[方法]采用RT-PCR技术,从感染PeVYV辣椒cDNA中扩增获得片段大小为471 bp的PeVYV P4基因,并克隆到原核表达载体pDEST17,转化E.coli Rosetta中进行诱导表达,采用Ni-NTA柱层析纯化.以纯化P4蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.制备的多克隆抗体采用Western blotting检测.[结果]原核表达的PeVYV P4蛋白,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为25 kDa的单一条带.Western blotting检测表明,制备的多克隆抗体,特异性的结合P4蛋白.PeVYV侵染辣椒样本检测表明,制备的P4多克隆抗体能特异性检测PeVYV.[结论]制备的PeVYV P4多克隆抗体,可用于特异性检测PeVYV P4蛋白,为进一步深入研究P4蛋白的功能奠定基础.

关键词： 辣椒脉黄病毒;P4基因;原核表达;蛋白纯化;多克隆抗体